Для борьбы с пандемией COVID-19 нужны быстрые и точные тесты на вирус. Чтобы обнаружить COVID-19, используются мазки из носоглотки и ротоглотки. Но взятие мазка из носоглотки требует тесного контакта медицинских работников и пациентов и может вызвать раздражение глотки, чихание и кашель. Это создает риск заражения вирусом медицинских работников. Кроме того, сбор образцов эпителия из носоглотки и ротоглотки вызывает дискомфорт, а у пациентов с тромбоцитопенией может вызвать кровотечение. Эти ограничения делают мазки неудобными для серийного мониторинга вирусной нагрузки. Тест слюны – неинвазивный анализ, который подходит для быстрой массовой диагностики коронавируса.

Содержание

Тест слюны на коронавирус: нужно ли откашливать слюну из горла

Задняя ротоглоточная слюна

В 2020 году китайские ученые первыми обнаружили SARS-CoV-2 в слюне. С помощью ПЦР они исследовали образцы слюны 23 пациентов с COVID-19 разной степени тяжести. У 87% пациентов в слюне была обнаружена РНК коронавируса.

В этом исследовании использовалась слюна заднего отдела ротоглотки. Чтобы сдать тест слюны на коронавирус, пациенты отхаркивали глоточный секрет.

Задняя ротоглоточная слюна представляет собой секрет, образующийся при кашле или откашливании, и относится к дыхательным выделениям – в нем смешиваются выделения верхних (носоглотка) и нижних (бронхи, легкие) дыхательных путей. Напротив, ротовая слюна вырабатывается слюнными железами и не относится к группе респираторных образцов.

Ротовая слюна

Исследование на макаках-резусах показало, что SARS-CoV инфицирует эпителиальные клетки в протоках слюнных желез. Исследование образцов слюны пациентов с COVID-19 обнаружило, что слюна содержит живые вирусы. Респираторные вирусы передаются контактным и капельным путями. Капли слюны выделяются при кашле. Исследование сезонного гриппа показало, что вирус содержится в обычном выдыхаемом воздухе в виде мелкодисперсного аэрозоля. Эти факты подтверждают, что COVID-19 может передаваться через слюну, даже есть у пациента нет респираторных симптомов.

Эпителий дыхательных путей покрыт ресничками. Реснички дыхательных путей колеблются в одном направлении и помогают оттоку слизи. Поэтому в слюне также содержатся секреты легких и носоглотки.

Итальянские ученые первыми обнаружили SARS-CoV-2 в ротовой слюне. Слюну собирали методом слюнотечения, избегая кашля или отхаркивания.

Это исследование принесло важное открытие: у некоторых пациентов с COVID-19 может быть отрицательный ПЦР-тест из носоглотки, однако положительный тест слюны. Таким образом, два последовательных отрицательных теста из носоглотки не всегда означают, что пациент не заразен.

Вывод

Сочетание образцов слюны и дыхательных путей может повысить чувствительность теста на коронавирус и снизить количество ложноотрицательных результатов.

Источник изображения: https://journals.sagepub.com/doi/10.1177/0022034520969670

Анализ слюны на коронавирус – безопасный и быстрый способ тестирования

Для анализа пациента просят откашлять слюну из горла в стерильную пробирку. Медицинские работники не нужны для взятия образца. Это снижает риск заражения медицинского персонала коронавирусом. Сбор образцов слюны можно проводить вне больниц, что также снижает вероятность распространения воздушно-капельных инфекций.

Взятие образца слюны не требует инвазивных процедур, поэтому оно быстрее и комфортнее для пациента и подходит для массового тестирования на COVID-19. Так как пациенты собирают слюну самостоятельно, не нужно ждать, пока медицинский работник возьмет образцы. Это значительно сокращает время до получения результата теста.

Чтобы быстрее обнаружить заражение SARS-CoV-2, ученые предложили объединять 5-10 образцов слюны в один пул. Каждый пул проходит ПЦР, и дальнейшее тестирование отдельных образцов проводится только в пулах, которые дали положительный результат на коронавирус. Эта стратегия подходит для районов с низкой распространенностью SARS-CoV-2.

Можно ли заменить мазок из носоглотки тестом слюны на коронавирус

Точность теста на COVID-19 по слюне у взрослых

Чтобы сравнить, с какой достоверностью будет обнаружен SARS-CoV-2 при ПЦР-тестировании с помощью мазка из носоглотки и тестировании на основе слюны, канадские ученые провели систематический обзор и метаанализ 16 исследований. В метаанализ были включены результаты ПЦР-тестов 5922 пациентов на основе образцов слюны, мазков из носоглотки или того и другого.

Диагностическая чувствительность теста слюны и мазка из носоглотки на коронавирус сопоставима. Чувствительность ПЦР слюны составила 83,2%, а специфичность – 99,2%. Чувствительность мазка из носоглотки составила 84,8%, а специфичность – 98,9%.

Исследование опубликовано в журнале The Journal of the American Medical Association.

Сравнение точности анализа на COVID-19 по слюне у детей и взрослых

Мексиканские ученые исследовали чувствительность и специфичность ПЦР-теста слюны на SARS-CoV-2 у детей и взрослых. Чувствительность теста слюны у детей была ниже предполагаемого значения.

В исследовании участвовали 156 детей, из которых 128 имели как минимум одно сопутствующее заболевание, а 91 проявляли клинические симптомы COVID-19. Взрослая группа – 326 сотрудников больницы, из которых у 271 были симптомы COVID-19.

Ученые сравнили результаты мазков из носоглотки и ротоглотки с результатами образцов слюны. Сразу после процедуры взятия мазка участников просили осторожно сплюнуть 5 раз в стерильную пробирку объемом 50 мл. Участникам не было предложено откашляться или попытаться обогатить свои образцы мокротой.

В группе детей чувствительность диагностического теста на основе слюны составила 82,3%, а специфичность – 95,6%. У 6 из 23 участников, которые дали положительный результат на SARS-CoV-2 по крайней мере в одном типе образцов, вирус был обнаружен в слюне, но не в мазке из носоглотки или ротоглотки, в то время как у 3 участников мазок из носоглотки или ротоглотки был положительным, а слюна – отрицательной. Вирусная нагрузка мазка из носоглотки или ротоглотки и слюны существенно не отличалась.

В группе взрослых чувствительность теста на основе слюны составила 77,8%.

В отличие от детей и подростков, у взрослых слюна показала значительно более низкую вирусную нагрузку, чем мазки из носоглотки или ротоглотки. Это может быть связано с различной динамикой выделения вируса в ротовой полости. Эта динамика зависит от возраста, сопутствующих заболеваний и приема лекарств.

Исследование опубликовано в журнале Frontiers in Pediatrics.

Вывод

Чувствительность теста слюны на коронавирус недостаточно высока, чтобы заменить мазок из носоглотки или ротоглотки. Ни мазок, ни слюна не могут выявить всех инфицированных SARSCoV-2.

Однако учитывая простоту получения образцов, тесты слюны можно использовать в программах массового скрининга на COVID-19.

Также тест слюны на COVID-19 поможет скорректировать ложноотрицательные результаты мазка из носоглотки. Недавнее исследование выявило бессимптомных носителей среди работников здравоохранения с отрицательным результатом ПЦР мазка из носоглотки только через слюну. Мазок из носоглотки может дать ложноотрицательный результат на коронавирус примерно в 30% случаев после появления симптомов. Поэтому для более точной диагностики COVID-19 будет полезно  сравнить результаты образцов из носоглотки и слюны.

Экспресс-тест слюны на антигены коронавируса

Экспресс-тесты на коронавирус можно использовать вне медицинских кабинетов или лабораторий. Эти тесты применяются, когда нужна очень быстрая диагностика населения: в театрах, школах, университетах, спортивных залах, ресторанах, торговых центрах и аэропортах. Экспресс-тесты не требуют медицинского персонала или специального оборудования.

Экспресс-тест на антиген выявляет присутствие вирусного белка в образце. Это отличает его от других медицинских тестов, которые обнаруживают антитела или нуклеиновые кислоты. Тест на антиген не определяет наличие антител к SARS-CoV-2. Он просто определяет наличие вируса непосредственно в момент анализа. Поэтому экспресс-тест подходит для программы массового скрининга на COVID-19.

Экспресс-тест слюны для выявления SARS-CoV-2 дает результаты менее чем за 10 минут, определяя присутствие шиповидного белка в образце слюны.

Как узнать результат экспресс-теста слюны на COVID-19

На тесте есть две отметки: тестовая (T) и контрольная (C). Если видны 2 цветные полосы (как тестовая, так и контрольная линии) – субъект инфицирован. А если видна только контрольная линия – субъект не инфицирован. Тест считается недействительным, если C-линия не видна, независимо от наличия T-линии.

Источник изображения: https://journals.sagepub.com/doi/10.1177/0022034520969670

О чувствительности экспресс-теста слюны информация противоречива. Одни исследования говорят о высокой чувствительности (93%), другие – о низкой.

Вывод

Диагностика SARS-CoV-2 по слюне эффективна для тестирования в местах массового скопления людей. Важная задача – выявить бессимптомных носителей коронавируса до того, как они войдут в помещение и распространят инфекцию. Экспресс-тесты на антигены в слюне могут стать ключевой стратегией сдерживания пандемии.

Методика определения вируса на основе ДНК-нанопереключателей

Сложности ПЦР-анализа мазка

Для транспортировки мазка на COVID-19 нужны дорогостоящие реагенты, которые стабилизируют вирус.

В лаборатории используется машина для полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для обнаружения вируса ПЦР при помощи ферментов увеличивает число копий фрагментов вирусной ДНК (амплифицирует). Ферменты повышают стоимость и сложность анализа из-за требований к их хранению, транспортировке и температурам использования.

Диагностику вирусной РНК затрудняют ограниченное время обнаружения, ресурсы лаборатории, низкая или меняющаяся вирусная нагрузка, перекрестно-реактивные антитела IgM (антитела к одному вирусу реагируют на антитела к другому).

Нанопереключатели – замена ПЦР

Ученые из Университета штата Нью-Йорк в Олбани разработали способ обнаружения вирусной РНК без амплификации.

В анализе используются программируемые ДНК-переключатели. Переключатели настраивают на обнаружение определенной вирусной РНК. Исходная форма переключателей – линейная. В присутствии вирусной РНК при гель-электрофорезе переключатели меняют форму на петлевую. Чтобы усилить сигнал ДНК-переключателей, вирусную РНК фрагментируют, и переключателям задается большее число мишеней.

Анализ на основе ДНК-нанопереключателей не требует предварительной амплификации с использованием ферментов, но совместим с ней. При этом предварительная амплификация дает резкое улучшение сигнала нанопереключателей.

ДНК-нанопереключатели чувствительны. Они могут обнаруживать ДНК-олигонуклеотиды и микроРНК (длиной ~ 22 нуклеотида).

Анализ можно проводить одновременно для 5 вирусных мишеней. Для этого для разных мишеней программируются петли разных размеров. Также анализ может различать разные штаммы одного вируса даже при высоком генетическом сходстве.

Так как ДНК-переключатели можно программировать, система универсальна. Она подходит для обнаружения множества вирусов, в том числе вирусов Зика (ZIKV), денге (DENV) и SARS-CoV-2. Система обнаруживает SARS-CoV-2 за 2 часа: 1 час на амплификацию, 40 минут на инкубацию с нанопереключателями, 25 минут на гель-электрофорез.

Система ДНК-переключателей проверена для обнаружения вирусной РНК в биологических жидкостях, в том числе в моче и слюне.

Исследование опубликовано в журнале Science.

Выводы

Сбор слюны не требует специализированного медицинского персонала. Так как испытуемые самостоятельно собирают образцы слюны, риск заражения медицинских работников резко снижается. Учитывая простоту получения образцов, тесты слюны можно использовать в программах массового скрининга на COVID-19.

Чувствительность теста слюны недостаточно высока, чтобы заменить мазок из носоглотки или ротоглотки. Однако анализ слюны на коронавирус поможет скорректировать ложноотрицательные результаты мазка и сдержать пандемию.

Полезная статья, нужная информация? Поделитесь ею!

Кому-то она тоже будет полезной и нужной:

Источники