История исследований

Более ранние исследования in vito и in vivo показали эффективность интерферонов альфа против кератита, вызванного вирусом герпеса 1. Исследования проводили на людях, обезьянах и кроликах. Наибольший противовирусный эффект был при введении интерферона в высоких концентрациях: 1 – 15 миллионов ед./мл. Местное применение интерферона альфа на ранней стадии заражения уменьшало длительность клинических проявлений.

Несмотря на малое количество данных, для лечения кошек с FHV-1 также было рекомендовано использование человеческого рекомбинантного интерферона альфа–2b (rHuIFN-α2b). При ежедневном пероральном введении наблюдались менее тяжелые клинические признаки по сравнению с контрольной группой.

Параллельно проводилось изучение in vitro противовирусных эффектов кошачьего рекомбинантного интерферона омега (rFeIFN-ω) у кошек и собак. При концентрации 50 000 ед./мл наблюдалось значительное снижение титров FHV-1.

Текущее исследование

Ученые поставили цель сравнить противовирусные эффекты in vitro человеческого интерферона rHuIFN-α2b и кошачьего интерферона rFeIFN-ω. Изучались два аспекта активности интерферона:

  • Подавление репликации вируса внутри инфицированных клеток. Эффект оценивался по числу возникших герпетических бляшек.
  • Механизм защиты неинфицированных клеток от заражения вирусом от клетки к клетке. Степень распространения вирусной инфекции оценивалась по размеру бляшек.

Схема эксперимента

Была взята популяция культуры клеток Crandell-Rees кошачьей почки. Клетки выращивали в 24-луночных культуральных планшетах.

Клетки обрабатывали rHuIFN-α2b или rFeIFN-ω в 12-и концентрациях: 100, 250, 500, 1000, 2500, 5000, 10 000, 25 000, 50 000, 100 000, 250 000, 500 000 ед./мл. Для поддержания постоянной концентрации интерферона обработка производилась в 3-х временных точках:

  • за 6 часов до добавления вируса;
  • одновременно с добавлением вируса;
  • одновременно с добавлением среды в верхний слой.

В каждую лунку добавляли по 1 мл раствора, содержащего FHV-1. После инкубации в течение 72 часов клетки фиксировали с помощью 10% раствора формалина. Среду удаляли, а клетки окрашивали.

Потом производили подсчет количества бляшек. Диаметр каждой бляшки оценивался с помощью измерительной сетки. Размер бляшек обработанных клеток сравнивали с размером контрольных культур.

Цитотоксический анализ на жизнеспособность клеток проводился с помощью спектрофотометрии. В каждой лунке питательную среду дополняли rHuIFN-α2b или rFeIFN-ω в тех же концентрациях, как и при противовирусном исследовании. Контрольную группу обрабатывали 100% метанолом в течение 12-и часов. Потом проводили инкубацию при 37°С в течение 12 часов. После этого производили расчет оптической плотности для каждой группы клеток.

Весь эксперимент был повторен 6 раз, чтобы установить воспроизводимость.

Результаты исследования

Уменьшение количества бляшек при лечении кошачьим интерфероном rFeIFN-ω по сравнению с контрольной группой:

  • концентрация 100 000 ед./мл – уменьшение на 54,7%;
  • концентрация 500 000 ед./мл – уменьшение на 59,8%.

Для группы человеческого интерферона rHuIFN-α2b ни одна из концентраций не приводила к значительному снижению количества бляшек.

Уменьшение размера бляшек наблюдалось в обеих группах. Рассчитан средний размер бляшек для каждой концентрации интерферона и вычислен процент от среднего значения в контрольной группе.

Концентрация
100 000 ед./мл 250 000 ед./мл 500 000 ед./мл
rFeIFN-ω 47,5% 81,0% 70,5%
rHuIFN-α2b 56,4% 75,7% 69,8%

 

Цитотоксический анализ не выявил существенных отличий для групп rHuIFN-α2b и rFeIFN-ω. Лечение интерфероном не вызывало клеточного токсикоза. Оптическая плотность клеток в обеих группах была значительно выше, чем в контрольной группе, обработанной 100% метанолом.

Выводы

  • Подтверждена видовая специфичность интерферона первого типа. Максимальная противовирусная активность наблюдалась в гомологичных клетках.
  • Ни один из методов лечения не привел к полному подавлению развития бляшек.
  • Лечение интерферонами может быть максимально эффективно в комбинации с другими противовирусными агентами на ранних стадиях инфекции FHV-1.

Источник исследования